جداسازی و کلون کردن بخشی از ژن nbbruc02 شتر بومی منطقه و انتقال آن به e.coli به منظور تولید واکسنهای سبز

پیشرفت روش های زیست شناسی مولکولی در دهة 1980، نقش زیادی در توسعه راهکارهای جدید برای تولید زیر واحدهای واکسنی ایفاد کرده است. تولید گیاهان ترا ریخته امید جدیدی در تولید واکسن های ارزان تر، ایمن تر و با قدرت ذخیره سازی راحت تر را ایجاد نمود. به همین دلیل، گیاهان به عنوان یک روش مهم جایگزین برای تولید طیف وسیعی از پروتئین های فعال ارزشمند در صنایع بهداشتی مطرح شدند. شتر دارای ویژگیهای فنوتیپی منحصر به فردی می باشد که در سایر پستانداران وجود ندارد. این ویژگیهای منحصر به فرد در جنبه های سلولی ومولکولی نیز می تواند حائز توجه باشند. ژنهای nbbruc02,03 که در شترهای بومی وجود دارد قادر به تشخیص آنتی ژن بروسلا از دو گونه اصلی بروسلا (بروسلا آبورتوس وبروسلا میلتنیس) بوده و آنها را از گونه هایی که از یرسینا هستند تشخیص می دهد. این مطالعه با هدف جداسازی و کلون کردن بخشی ازژنnbbruc02 شتر بومی و الایمنت نمودن با سایر توالی های موجود و انتقال آن به باکتری e.coli به منظور تولید واکسن های سبز انجام شد. نمونه خون شتر تک کوهانه بومی 5 ساله از یک شتر داری در شهرستان زابل تهیه شد. استخراج dnd انجام گرفت ، جهت اطمینان از کیفیت وکمیت dna استخراج شده از روشهای اسپکتوفتومتری و ژل آگارز استفاده شد . جهت تکثیر قطعه مورد نظر ، از روش pcr گرادیان دمایی استفاده شد و بهترین دمای اتصال بدست آمد. سپس استخراج ژل انجام و محصول بدست آمده جهت تعیین توالی به شرکت ارسال شد. توالی دریافت شده از شرکت با توالی موجود در ncbi مقایسه وتوسط نرم افزارpraimer blast موردتائید قرارگرفت . جهت کلون نمودن ژن موردنظر از یک ناقل t/a استفاده شد . سپس پلاسمید به سلولهای آماده e.coli منتقل شد . از کلونیهای سفید واکشت انجام شد . استخراج پلاسمید انجام گرفت . سپس هضم آنزیمی پلاسمیدهای نوترکیب t/a با استفاده از آنزیم bamhi صورت پذیرفت . نتایح حاصله حاکی از آن بود که ژن nbbruc02 در شترهای بومی منطقه وجود دارد وکلون کردن آن در باکتری e. coliبا موفقیت انجام پذیرفت .